OncoImmunin

PhiPhiLux

CaspaLux

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PhiPhiLux原理介紹

PhiPhiLux 是 OncoImmunin ^TM生產的活細胞凋亡偵測 kit。

1. PhiPhiLux 的偵測原理是利用設計一段可供 Caspase3 及 Caspase3-like 蛋白

           辨識, 且能主動被細胞嗜入, loop 結構兩端標有螢光的 peptide, 此段 peptide 稱為

           PhiPhiLux。

      2. 當此 PhiPhiLux 與受到刺激而產生凋亡現象的細胞 (suspension / adherence )

          共同培養時, 會主動被這些已經 Induced Living Cell 大量噬入, 由於此活細胞內部

          產生的 Caspase3 結合到 PhiPhiLux 上的 GDEVDGI, 加上序列 PNP 的輔助, 造成

          PhiPhiLux 結構上的斷裂, 使 Loop 結構兩端的螢光物質結合, 因而產生螢光。

          也因此設計原理, PhiPhiLux 有放大活細胞內 Caspase3 與 Caspase3-like 的

          訊號放大的功能。

Figure1：左邊的圖是 PhiPhiLux

                 作用動畫. 以下用文字表示。

 PhiPhiLux-G1D1     Caspase3

 PhiPhiLux-G2D2  + Caspase3-like

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                               ↓

 PhiPhiLux-G1D2   505~530nm

 PhiPhiLux-G2D2   552~580nm

 <注意事項>

   1. PhiPhiLux 為螢光物質, 操作需避光。

   2. PhiPhiLuX 目標為活細胞, 切勿使用於

       過度誘發之凋亡死細胞。

   3. Caspase3會產生於發炎、凋亡與其他

        細胞生理狀態, 請設計實驗時, 謹慎考慮。

   4. PhiPhiLux 培養時間為 30 ~ 60 分鐘,

       並且需要在90分鐘內觀察偵測完畢,切勿

       長時間培養, 避免螢光耗弱或細胞產生

         過度訊號放大之情形。

PhiPhiLux 應用性：Confocol microscopy

Figure3：PhiPhiLux 搭配

                Mitochondrial membrane

                  potential染色結果

PhiPhiLux 在流式細胞儀的應用：

Figure4： 

              A：Control Cell

              B：Cell + PhiPhiLux

              C：Cell + PhiPhiLux + Anti-FAS Ab

              D：Cell + PhiPhiLux + Anti-FAS + Inhibitor

PhiPhiLux 的優勢：

       1. PhiPhiLux專一性特高, 專測Caspase 3 及Caspase 3 - like。

           PhiPhiLux 較傳統 PI 染色, 能偵測到更早期、更完整、更準確的活細胞凋亡狀態。

       2. PhiPhiLux 敏感性高, 更能準確的指出單一細胞的凋亡狀態。

       3. PhiPhiLux 操作時, 不需做細胞膜的固定與打洞等處理步驟, 只需60分鐘即可完成培育。

       4. PhiPhiLux 不像傳統 ELISA方式, 需要將細胞破壞, 所以更能偵測出早期細胞開始凋亡的時間。

PhiPhiLux 的偵測 :

       1. 使用流式細胞儀以488nm激發光, 偵測定量與定性。

       2. 使用螢光顯微鏡觀察細胞凋亡型態與螢光位置。

       3. 可選擇紅綠兩種不同螢光的顏色, 搭配 Annexin-V、Mitochondria membrane potential 或

           其他方式共同染色, 掌握更多細胞凋亡的證據。

           PhiPhiLux-G1D2   505~530nm

         PhiPhiLux-G2D2   552~580nm

CaspaLux 的問世 !!

        禾杏生物科技公司於2004年底，引進與 PhiPhiLux 相同原理的新型好用 kit --- CaspaLux,

        提供使用者使用與 PhiPhiLux 相同的便利性，偵測 caspase-8、9。

使用TRAIL誘發凋亡的乳房腫瘤細胞株 (231-01)  +  CaspaLux L2D2

所表現出來的紅色螢光。

        CaspaLux L1D2 --------  Caspas-8 偵測試劑。

        CaspaLux M1D2 --------  Caspas-9 偵測試劑。

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