OncoImmunin

CytoxiLux

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CytoxiLux介紹

CytoxiLux 是 OncoImmunin ^TM生產的細胞毒殺試驗偵測 kit。

CytoxiLux 曾經榮獲28點數的高額論文評鑑。(Nature Med 8: 185-189(2002))。

CytoxiLux 採用可釋放螢光的基質(substrate), 來探討細胞凋亡時所活化的酵素活性, 可以用在檢測每一顆目

        標細胞 (target cell) 是否受到效應細胞 (effector cell) 的影響而引發目標細胞的細胞凋亡。

CytoxiLux 最特殊的地方, 在於這個分析方式,完全顛覆了傳統的放射性同位素鉻 (⁵¹Cr) 的偵測方式, 不僅不會使

        操作人員暴露在危險的放射環境下, 更免去了實驗室處理放射性廢料的成本。

CytoxiLux 比使用放射性同位素鉻更符合現代實驗室的需求, 例如, 細胞毒性的偵測方式以探討昇化途徑來取代

        反應最終的細胞破裂程度; 因為鉻的偵測方式僞陽性較高, 所以CytoxiLux 的敏感度遠遠比各地偵測方式更為靈

        敏, 並且因為偵測酵素活性的時間點比細胞破裂的時間發生的早, 所以實驗的總耗時數, 比鉻的偵測方式少, 可以加

        快實驗的腳步, 將原本需要 4~6 小時的放射性同位素方式, 縮短成採用CytoxiLux 的 20 分鐘至 2 小時以內。

CytoxiLux 可以使用流式細胞儀 (FlowCytometry) 或是螢光顯微鏡 (Fluorescence microscopy) 來判

         讀實驗的結果, 更可以判讀單一細胞的變化, 並且可以進行Primary cultured cell的實驗; 此外, CytoxiLux

            不僅可以分析目標細胞的凋亡程度, 也可以配合其他免疫標記法 (immunophenotypic analyses) 分析效應

            細胞 (effector cell) 的生理反應。

CytoxiLux 原理介紹

CytoxiLux 會在目標細胞 (target cell) 標記上紅色螢光之後, 與效應細胞 (effector cell) 一起培養, 接著在適

       當的時間點, 移除細胞的培養液, 接著再加入酵素的基質(substrate), 經過適當的培養與清洗之後, 就可以使用流

       式細胞儀或螢光顯微鏡進行分析, 當基質 (substrate) 因酵素的活化而被切割 (cleavage) 後, 會增加細胞內的綠

       色螢光的呈色。

      CytoxiLux 簡單的說, 也就是先把目標細胞 (target cell) 染上具膜專一性的紅色螢光, 當此目標細胞與效應細胞 

     (effector cell) 共同作用, 一但作用導致效應細胞產生caspase活性, 則加入的基質 (substrate) 將會進入活的

       效應細胞, 在內部進行綠色螢光表現。最後則由流式細胞儀或螢光顯微鏡進行呈現分析。

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Figure1 : 上圖為CytoxiLux 基質 (substrate) 作用動畫, 以下用文字表示。

CytoxiLux + Caspase    

CytoxiLux

 <注意事項>

   1. CytoxiLux 為螢光物質, 操作需避光。

   2. CytoxiLuX 目標為活細胞, 切勿使用於過度誘發之

          凋亡死細胞。

CytoxiLux 應用性：Confocol microscopy

Figure2：MDA-MB-468 cells 使用 CytoxiiLux

進行標記。                                   

Figure3：MDA-MB-468  +  NK-92

                 CytoxiLux 染色結果。

CytoxiLux 在流式細胞儀的應用：

Figure4 : MDA-MB-468 cell + NK-92 使用 CytoxiLux的流逝細胞儀分析結果。

Figure5 : 引用自 Nature Med 8: 185-189(2002) 使用 CytoxiLux 進行的CTL實驗。

CTL-mediated Killing of target cell was directly visualized using the microscopy FCC assay.

CytoxiLux 的優勢：

       1. CytoxiLux 對於效應細胞 ( effector cell), 不需進行細胞膜的破壞與處理。直接培育可得漂亮而完整的細

                胞與結果, 並節省膜處理的費用與時間。對於使用者想要做出漂亮而完整的結果來說, 是最佳的選擇。

       2. CytoxiLux 採用免役螢光方式呈現結果, 完全取代了傳統的放射性同位素鉻 (⁵¹Cr) 偵測方式, 不但避免了讓

                使用者暴露在高放射環境的危險, 也讓使用者節省了放射廢料處理與審核的麻煩, 時間與經費。

       3.  CytoxiLux 相對於傳統的放射性同位素鉻的偵測方式, 從 4 ~ 6 小時縮短至 20 分鐘到 2 小時以內。

                CytoxiLux 更加比放射性同位素法, 有更高的敏感性。

       4.  CytoxiLux 可以直接地使用流式細胞儀 (FlowCytometry) 或螢光顯微鏡 (Fluorescence 

             microscopy) 進行偵測, 不需使用多套系統或多種方式來偵測, 可以節省使用者購買使用多套系統的時間與

                 金錢。

CytoxiLux 與 ⁵¹Cr Release Assay的比較。